SE宣布《勇者斗恶龙 神剑 假面女王与镜之塔》将启用声优进行配音，这是日版《勇者斗恶龙》系列作品首次有语音的加入（美版的《勇者斗恶龙VIII》有语音）。为游戏中角色配音的是木下あゆ美、小西大树和松田贤二 3位声优，他们所扮演的角色如下：
赛蒂亚（声优：木下 あゆ美）：原先是在神殿工作的少女，其他具体不明。
迪因（声优：小西大树）：阿尔索德王国的王子，掌握豪华的剑术以及魔法。
波特（声优：松田贤二）：主人公的父亲，以前是有名的剑士，而现在主要使用魔法作战。
制作人市村龙太郎表示：“这是一款需要突出类似于电影、电视那样气氛的作品，因此决定启用声优为角色们配音。另外我们还找来过去有参加过特摄片拍摄的人员，战斗中的‘嘿、哈’等配音将极具临场感。”
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